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SEC法检测生物制药中蛋白质团聚体/聚集体时的问题点及其

内容节点
概述
实验/设备条件
样品提取
实验/操作方法
实验结果/结论
仪器/耗材清单
SEC法(Size Exclusion Chromatography:尺寸排阻色谱法)是一种用于定量生物制药中蛋白质团聚体/聚集体的测定方法已知本测定法具有实验协议简便及精密度高等众多优点,是一种高有效性和高实用性的测定法,但其仍然存在很多问题尤其是采用FFF(Field Flow Fractionation:场流分级)法和AUC(Analytical Ultra Centrifugation:超速离心分析)法等无固定相的检测方法测定同一样品时,显示测定的团聚体定量值高出SEC法测定值约2倍,因此美国的研发人员及FDA对根据SEC法得出的团聚体定量结果及其合法性提出了质疑

用SEC法评估和定量生物制药中蛋白质团聚体/聚集体的各种问题点如下所示,本文分别对问题点中的1至6进行叙述,同时提出各自的解决方法
用SEC法评估和定量生物制药中蛋白质团聚体/聚集体的各种问题点
1. 保护柱及分析柱柱头筛板截留粒径大于0.1 m的团聚体和聚集体
2. SEC色谱柱填料与样品之间的相互作用
3. 色谱柱内流动相稀释YZ可逆交联反应
4. 高压下流动相移动导致团聚体解离/剪切
5. 分子量的非依赖性分离
6. 检测灵敏度
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